細胞污染小知識
Oxytech
細胞作為重要的實驗?zāi)Ｐ蛷V泛應(yīng)用于各類生物實驗, 幾乎所有科研實驗室中都需進行細胞培養(yǎng)。細胞培養(yǎng)過程中最大的威脅就是細胞污染, 凡是混入細胞培養(yǎng)環(huán)境中, 對細胞生存有害的成分和造成細胞不純的異物都應(yīng)視為污染。細胞一旦遭到污染,所有的實驗結(jié)果都會變得毫無意義。因此, 及時檢測并鑒定出所培養(yǎng)的細胞是否被污染至關(guān)重要。微生物污染是細胞培養(yǎng)中的一個主要問題，但是可以采用一系列程序來防止或消除污染。對實驗室進行定期清潔、使用高效型消毒劑是避免細胞培養(yǎng)過程中由于實驗室環(huán)境引起細胞污染的主要措施。
細胞培養(yǎng)主要常見污染
細胞培養(yǎng)污染主要分為兩類，一是化學(xué)污染物，例如：培養(yǎng)基、血清和水中的雜質(zhì)、內(nèi)毒素、增塑劑和去污劑。
二是生物污染物，例如：細菌、霉菌、酵母、病毒、支原體、原蟲以及其他細胞系的交叉污染。
那么究竟微生物造成細胞污染我們又該如何應(yīng)對？
一、微生物污染分類
01
細菌污染
細菌污染是細胞培養(yǎng)中最常見的污染，其污染主要來源于實驗室環(huán)境、實驗人員（實驗服）、實驗用具等，甚至在細胞培養(yǎng)過程中添加抗菌素（一般為預(yù)防劑量），也可能因為操作不慎而引起污染。
種類：造成細菌感染最常見的有革蘭氏陽性菌如枯草桿菌、葡萄球菌等；大腸桿菌、假單胞菌等革蘭氏陰性菌也會造成細菌感染。
解決方法：
日常清潔時，在工作前和工作期間，對于細菌污染，特別是在發(fā)生任何潑濺后，應(yīng)使用70%-75%的乙醇擦拭工作臺面。
02
真菌污染
真菌污染是細胞培養(yǎng)過程中最常見的另一種污染，尤其在霉雨季節(jié)，霉菌污染尤為嚴重。另外由于真菌可以通過孢子繁殖，因此一旦污染很容易發(fā)生擴散。
種類：常見的真菌感染有煙曲霉菌、黑曲霉菌、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌污染等。
解決辦法：
對于真菌污染，酒精對真菌的效力有限，可以使用奧克泰士即用型殺孢子劑來解決乙醇無法較好解決的酵母、霉菌、芽孢的污染問題。
03
支原體污染
支原體是一種大小介于細菌和病毒之間，并獨立生活的原核微生物，廣泛存在于人和動物體內(nèi)。
種類：細胞培養(yǎng)中常見的支原體有口腔支原體、精氨酸支原體、萊氏無膽甾原體、豬鼻支原體、肺炎支原體和發(fā)酵支原體，其中前四者占據(jù)支原體污染的絕大比例。
支原體污染具有隱蔽性，他們可以與細胞長期共存，培養(yǎng)基一般不渾濁。大部分細胞被污染后似乎無明顯變化，但其實支原體會抑制細胞生長，并且導(dǎo)致染色體畸變等，對細胞培養(yǎng)實驗影響巨大。
解決方法：
可以使用過氧化氫銀離子溶液，從源頭遏制支原體污染，科學(xué)-精準(zhǔn)消毒，生態(tài)無毒無殘留同時呵護實驗人員的職業(yè)健康，可以放心使用！
04
黑膠蟲污染
黑膠蟲是一種生物還是非生物，學(xué)術(shù)界至今還有爭議。這里我們暫且將其認作是一種微生物。黑膠蟲污染主要來源于血清。
特點：黑膠蟲污染起初對細胞并無影響，當(dāng)達到一定數(shù)量時則會影響細胞生長。受黑膠蟲污染的細胞液通常清亮無變化，在高倍顯微鏡下可以觀察到點狀片狀的游動小體，做布朗運動。
05
原蟲污染
原蟲：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點狀物數(shù)量非常多，輕微活動，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但他們的數(shù)量小，細胞站優(yōu)勢所以不會影響到細胞的正常生長，只有當(dāng)他們到達一定的數(shù)量時就會影響到細胞的生長，最終形成惡性循環(huán)。
06
病毒污染
病毒作為一種比支原體更小的微生物，體型在nm級，很難用常規(guī)方法檢測到。病毒污染分為外源性和內(nèi)源性，污染主要來源為細胞系，常見于雜交瘤細胞。
特點：病毒污染的細胞液通常清亮無變化，大部分被污染的細胞也不會產(chǎn)生形態(tài)及病理現(xiàn)象，小部分病毒會造成細胞變圓、腫脹、脫落。
病毒污染可用血細胞吸附實驗、免疫熒光抗體法以及電子顯微鏡法檢測，但其清除是十分困難的，一旦不幸被污染，建議直接重新引入高質(zhì)量細胞株。
總結(jié)：
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第一步：使用前后，應(yīng)對工作臺面進行消毒，并定期清潔周圍區(qū)域和設(shè)備。
第二步：日常清潔時，在工作前和工作期間，特別是在發(fā)生任何潑濺后，應(yīng)使用70%乙醇擦拭工作臺面。（70%-75%乙醇優(yōu)勢是對細菌具有較好的殺滅作用，但對真菌的效力有限，可以使用奧克泰士來解決乙醇無法較好解決的酵母、霉菌、芽孢的污染問題。）
第三步：細胞房環(huán)境要做全面的消殺，以及人員手部等防止二次污染?。?/span>
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