細(xì)胞培養(yǎng)室如何有效避免微生物交叉污染？ | 細(xì)胞房消毒是一項(xiàng)非常重要的任務(wù)，因?yàn)樗梢灶A(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)中的污染和交叉感染。細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的生物污染包括細(xì)菌芽孢霉菌支原體噬菌體污染等。對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行定期清潔、使用高效型消毒劑是避免細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中由于實(shí)驗(yàn)室環(huán)境引起細(xì)胞污染的主要措施
對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)，污染是最大的敵人，不管是設(shè)備、試劑亦或是環(huán)境造成的污染，這是每個(gè)養(yǎng)細(xì)胞的同志所頭疼的事情，我們先識(shí)別下污染的分類：
細(xì)菌芽孢污染
培養(yǎng)細(xì)胞受細(xì)菌污染后，會(huì)出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁，pH改變。污染后細(xì)胞發(fā)生病理改變，生長(zhǎng)不良、胞內(nèi)顆粒增多、增粗，最后變圓脫落死亡。以白色葡萄球菌較為常見(jiàn)。
真菌污染
培養(yǎng)細(xì)胞受真菌污染后，可見(jiàn)培養(yǎng)液中漂浮著白色或淺黃色的小點(diǎn)，有的散在生長(zhǎng)，培養(yǎng)液一般不發(fā)生混濁；倒置顯微鏡下可見(jiàn)絲狀、管狀或樹(shù)枝狀的菌絲縱橫交錯(cuò)在細(xì)胞之間或培養(yǎng)基中，有的呈鏈狀排列。真菌污染后，細(xì)胞生長(zhǎng)變慢，但最后由于營(yíng)養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細(xì)胞脫落死亡。
支原體污染
支原體是沒(méi)有細(xì)胞核結(jié)構(gòu)的原核生物，多吸附于細(xì)胞表面或散在于細(xì)胞之間，可抑制細(xì)胞的代謝和成長(zhǎng)，改變核酸合成、影響細(xì)胞的抗原性、導(dǎo)致染色體改變等。培養(yǎng)細(xì)胞受支原體污染后，由于支原體生長(zhǎng)緩慢，開(kāi)始不易發(fā)現(xiàn)。部分敏感細(xì)胞可見(jiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖變慢，多數(shù)細(xì)胞污染后無(wú)明顯變化。若不及時(shí)處理，會(huì)產(chǎn)生交叉污染，又因常規(guī)培養(yǎng)基中預(yù)防細(xì)菌和霉菌的抗生素對(duì)它沒(méi)有作用，因此防治支原體的污染非常重要。
噬菌體污
噬菌體是一種寄生于細(xì)菌上的病毒，可以感染并破壞細(xì)菌。噬菌體污染會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響，影響實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性和準(zhǔn)確性。此外，噬菌體污染還可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的誤解和實(shí)驗(yàn)人員的健康威脅。
二細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中環(huán)境污染途徑
1，取放細(xì)胞時(shí)引起的污染
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，取放細(xì)胞是最基本的操作，培養(yǎng)房開(kāi)關(guān)門的瞬間，環(huán)境中的微生物或多或少會(huì)進(jìn)入培養(yǎng)箱中，而且內(nèi)外溫差導(dǎo)致內(nèi)門冷凝水的產(chǎn)生，極易吸附微生物，都是造成培養(yǎng)箱污染的風(fēng)險(xiǎn)因素。
2，滅菌不到位造成的二次污染
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，因其它操作問(wèn)題（如培養(yǎng)基潑灑，水盤污染等），造成培養(yǎng)房的大規(guī)模污染也時(shí)常會(huì)發(fā)生，此時(shí)就需要對(duì)培養(yǎng)箱進(jìn)行滅菌消毒，常規(guī)的消毒（如紫外照射）只能達(dá)到表面消毒的效果，特別是對(duì)真菌等頑固性污染，無(wú)法進(jìn)行有效滅菌，導(dǎo)致后續(xù)培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞污染頻發(fā)。
三傳統(tǒng)消毒方式
在傳統(tǒng)的細(xì)胞房消毒方法中，常用紫外線、高溫、酒精等消毒方式。
01、紫外線消毒
紫外線消毒是通過(guò)紫外線殺死或去除微生物。
優(yōu)勢(shì)：適合無(wú)遮擋敞開(kāi)型環(huán)境和空氣消毒，能夠在短時(shí)間內(nèi)達(dá)到殺菌效果。使用成本相對(duì)較低，由于不投加化學(xué)藥劑，不會(huì)對(duì)水和環(huán)境產(chǎn)生影響。
缺點(diǎn)：殺菌效力較低，無(wú)法殺滅霉菌（孢子）、芽孢等高抗性微生物。一些被紫外線照射失活的細(xì)菌可形成“光復(fù)活"，另外一些細(xì)菌可能存在著“暗復(fù)活"現(xiàn)象。紫外線燈套容易結(jié)垢，需頻繁清洗以維持效果，另外紫外線存在老化問(wèn)題，要求現(xiàn)場(chǎng)操作人員具備較高技術(shù)工藝，及時(shí)測(cè)定衰減程度并進(jìn)行校正或更換，無(wú)法達(dá)到可控、可計(jì)量的消毒標(biāo)準(zhǔn)。紫外線不能直接照射人體，所以只能在無(wú)人情況下使用。受空間環(huán)境因素制約，所以通常作為一種輔助性消毒措施。
02、高溫消毒
高溫消毒是通過(guò)高溫殺死或去除微生物。高溫消毒有很多優(yōu)點(diǎn)，例如能夠殺死微生物的內(nèi)部、不會(huì)產(chǎn)生化學(xué)殘留物等。但是，高溫消毒也有一些缺點(diǎn)。首先，高溫消毒需要使用高溫設(shè)備，這會(huì)增加成本。其次，高溫消毒需要一定的時(shí)間，因此需要進(jìn)行計(jì)劃和安排。最后，高溫消毒可能會(huì)對(duì)一些細(xì)胞培養(yǎng)物造成損傷。
03、酒精擦拭消毒
酒精擦拭消毒是常見(jiàn)的一種消毒方法，但酒精易揮發(fā)，不穩(wěn)定。只能用于物體表面消毒，其消毒主要針對(duì)普通細(xì)菌，對(duì)高抗性的芽孢、霉菌等無(wú)效。
70%-75%乙醇優(yōu)勢(shì)是對(duì)細(xì)菌具有較好的殺滅作用，但對(duì)真菌的效力有限，可以使用奧克泰士來(lái)解決乙醇無(wú)法較好解決的酵母、霉菌、芽孢的污染問(wèn)題。
對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)，最重要的是杜絕一切可能的污染源。
四如何有效避免污染
1.重視細(xì)胞房管理工作，規(guī)范操作
定期進(jìn)行細(xì)胞房清潔消毒工作，規(guī)范實(shí)驗(yàn)人員操作（如身著白大褂、換鞋等），創(chuàng)造潔凈培養(yǎng)環(huán)境。
2.避免頻繁查看細(xì)胞
做好實(shí)驗(yàn)規(guī)劃，減少培養(yǎng)箱門開(kāi)關(guān)的頻率，取放細(xì)胞時(shí)需佩戴潔凈的手套，并用少量的 70% 醫(yī)用酒精（過(guò)多會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)箱中殘留乙醇蒸汽）擦拭培養(yǎng)瓶/皿表面，從而降低細(xì)胞培養(yǎng)箱污染的風(fēng)險(xiǎn)；
3.定期維護(hù)和滅菌，預(yù)防污染
定期清潔維護(hù)，培養(yǎng)箱內(nèi)用水滅菌后使用并定期更換，選擇培養(yǎng)箱時(shí)，可優(yōu)先考慮有自動(dòng)滅菌功能的培養(yǎng)箱。細(xì)胞房一旦發(fā)生污染，及時(shí)進(jìn)行消毒滅菌工作。
奧克泰士高效型殺孢子劑，滿足潔凈區(qū)和實(shí)驗(yàn)室的苛刻滅菌要求：
01）快速高效殺滅芽孢、霉菌等高抗性微生物，
02）全面殺滅真菌、細(xì)菌、病毒等各種類型的微生物。
03）食品級(jí)生態(tài)型，無(wú)色無(wú)味，呵護(hù)員工職業(yè)健康。
04）良好的材料兼容性，基本無(wú)腐蝕，適用于金屬、橡塑等各種材料。同時(shí)，作用完畢后分解物只有水和氧氣，使用安全，沒(méi)有刺鼻氣味，環(huán)保型殺孢子劑。